Fe65 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403226

Panoramica

APBB1 codifica la proteina adattatrice Fe65, un interattore arricchito nei neuroni della proteina precursore dell’amiloide (APP) che collega il traffico di membrana alla segnalazione nucleare. Fe65 partecipa alla processazione di APP e alle vie endocitiche attraverso il legame, mediato dal dominio PTB, con APP e recettori correlati, e assembla complessi multiproteici con fattori come AICD e regolatori trascrizionali per influenzare l’espressione genica. Attraverso queste interazioni, Fe65 mette in relazione la funzione sinaptica, la dinamica del citoscheletro e la proteolisi regolata, processi spesso studiati nella ricerca sulla neurodegenerazione. Alterazioni della segnalazione APP–Fe65 e dei programmi trascrizionali a valle sono state investigate nel contesto dei meccanismi legati alla malattia di Alzheimer e di risposte più ampie allo stress neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fe65 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene APBB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del APBB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto APBB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fe65.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di APBB1 per lo studio della segnalazione di Fe65, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni APBB1 critici per la funzione di Fe65
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di APBB1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fe65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Fe65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus APBB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fe65 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Fe65 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia APBB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio APBB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.