Plasmide Double Nickase (h) FBL10: sc-403232-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FBL10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FBL10 Double Nickase (h) et le plasmide FBL10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KDM2B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FBL10 Antibody (5G1): sc-293279
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FBL10 | sc-403232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FBL10 | sc-403232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain KDM2B code la protéine FBL10, une déméthylase des histones à domaine JmjC et un facteur associé à la chromatine, qui relie la reconnaissance des îlots CpG à la régulation transcriptionnelle. FBL10 participe au contrôle épigénétique de l’expression génique par la déméthylation des lysines des histones et par sa coordination avec des mécanismes associés aux complexes Polycomb, influençant l’accessibilité de la chromatine et les programmes géniques du développement. En modulant des voies impliquées dans la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien de l’identité cellulaire, l’activité de KDM2B/FBL10 contribue à façonner des états transcriptionnels spécifiques de lignée. Une dérégulation de KDM2B a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique et des phénotypes de type « stem-like » altérés, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique.
FBL10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KDM2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KDM2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KDM2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KDM2B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.