FAM83B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415158

Panoramica

FAM83B (family with sequence similarity 83 member B) è un adattatore citoplasmatico di segnalazione implicato nell’amplificazione degli output delle tirosin-chinasi recettoriali e dell’attività della via MAPK/ERK a valle, sostenendo programmi proliferativi e di sopravvivenza nelle cellule epiteliali. È stato associato alla modulazione della dinamica di segnalazione EGFR/RAS e al crosstalk con processi legati a PI3K, influenzando le risposte trascrizionali e la progressione del ciclo cellulare. Un’espressione deregolata di FAM83B è stata riportata in diversi contesti tumorali ed è studiata come fattore che contribuisce alla robustezza della segnalazione oncogenica, a fenotipi di tolleranza alle terapie e a una dipendenza alterata dai fattori di crescita. Queste caratteristiche rendono FAM83B un nodo utile per analizzare l’architettura delle vie di segnalazione, il controllo tramite feedback e le relazioni genotipo–fenotipo nei modelli di biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM83B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FAM83B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FAM83B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FAM83B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAM83B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FAM83B per lo studio della segnalazione di FAM83B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FAM83B critici per la funzione di FAM83B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FAM83B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAM83B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FAM83B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FAM83B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAM83B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FAM83B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FAM83B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FAM83B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.