FAF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420281

Panoramica

Il Fas-associated factor 1 (FAF1), codificato nel topo dal gene Faf1, è un adattatore multifunzionale coinvolto nella regolazione dell’apoptosi e nel controllo di qualità delle proteine. FAF1 partecipa a complessi di segnalazione associati ai recettori della morte e modula vie dipendenti dalle caspasi, interagendo al contempo con componenti del sistema ubiquitina–proteasoma per influenzare l’ubiquitinazione e il turnover delle proteine di segnalazione. Attraverso queste attività, FAF1 collega le risposte allo stress alle decisioni sul destino cellulare e contribuisce al mantenimento dell’omeostasi cellulare. Un’espressione o una funzione deregolata di FAF1 è stata associata a una sensibilità apoptotica alterata ed è stata studiata in contesti che includono neurodegenerazione, regolazione immunitaria e segnalazione correlata al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Faf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Faf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Faf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Faf1 per lo studio della segnalazione di FAF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Faf1 critici per la funzione di FAF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Faf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Faf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Faf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Faf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.