EYA4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404355

Panoramica

EYA4 codifica un membro della famiglia Eyes Absent (EYA) che funge da coattivatore trascrizionale e fosfatasi, integrando programmi di segnalazione coinvolti nello sviluppo e nella risposta allo stress. Attraverso le sue interazioni con le proteine SIX e DACH, EYA4 contribuisce a reti di regolazione genica che controllano le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e la morfogenesi specifica dei tessuti. L’attività di tirosina-fosfatasi della proteina è stata collegata alla modulazione delle risposte al danno al DNA e di altri processi dipendenti dalla fosforilazione che plasmano l’omeostasi cellulare. Un’alterata espressione di EYA4 o la sua alterazione genomica è associata a fenotipi sensoriali e cardiaci ed è stata inoltre riportata in studi sul silenziamento epigenetico associato ai tumori, a supporto della sua rilevanza per indagini meccanicistiche in modelli di malattia umana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EYA4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EYA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EYA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EYA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EYA4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EYA4 per lo studio della segnalazione di EYA4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EYA4 critici per la funzione di EYA4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EYA4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EYA4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EYA4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EYA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EYA4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EYA4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EYA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EYA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.