Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ETEA Plasmide Double Nickase (h): sc-403730-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ETEA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ETEA Double Nickase Plasmid (h) e il ETEA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ETEA Antibody (F-7): sc-374098
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ETEA Plasmide Double Nickase (h) | sc-403730-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETEA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403730-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAF2 codifica la proteina residente nel reticolo endoplasmatico ETEA (nota anche come UBXD8), un adattatore con dominio UBX che collega i substrati ubiquitinati all’ATPasi p97/VCP per favorire la degradazione associata al RE (ERAD). Coordinandosi con le ligasi dell’ubiquitina di membrana del RE e con i macchinari associati alle goccioline lipidiche, ETEA influenza la proteostasi, le risposte allo stress da proteine mal ripiegate e il metabolismo lipidico, incluso il turnover di regolatori chiave dell’omeostasi di acidi grassi e steroli. Un’attività alterata di FAF2/ETEA è stata associata a una deregolazione della segnalazione dello stress del RE e al rimodellamento metabolico osservati in contesti quali l’adattamento delle cellule tumorali e i disturbi epatici del metabolismo lipidico, rendendola rilevante per lo studio della tolleranza allo stress e della regolazione dei lipidi di membrana.
ETEA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.