ETBR Plasmide Double Nickase (h): sc-401804-NIC

EDNRB codifica il recettore dell’endotelina di tipo B (ETBR), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che lega i peptidi dell’endotelina per regolare i flussi intracellulari di calcio, la segnalazione della fosfolipasi C e le vie a valle associate a MAPK/ERK e PI3K. L’attività di ETBR contribuisce alla migrazione e alla differenziazione delle cellule della cresta neurale, allo sviluppo dei melanociti e al controllo del tono vascolare attraverso reti di segnalazione dipendenti dall’endotelina. Nella biologia umana, la disfunzione di EDNRB è collegata a disturbi dello sviluppo del sistema nervoso enterico, come la malattia di Hirschsprung, e a fenotipi di pigmentazione, a riflesso del suo ruolo nella patterning dello sviluppo e nei programmi di motilità cellulare. Un’alterata segnalazione di EDNRB è inoltre studiata nel contesto delle interazioni tra cellule tumorali e microambiente e della plasticità di linea, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione dei GPCR e sulle vie dello sviluppo.

ETBR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EDNRB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EDNRB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EDNRB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EDNRB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.