EphA7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401722-LAC-2

L’EPHA7 umano codifica la tirosin-chinasi recettoriale EphA7, un recettore delle efrine ancorato alla membrana che media una segnalazione dipendente dal contatto per regolare il posizionamento cellulare, la guida assonale e la formazione dei confini tissutali durante lo sviluppo. L’attivazione di EphA7 da parte dei ligandi ephrin-A innesca una segnalazione bidirezionale e vie a valle che includono il controllo, da parte delle GTPasi della famiglia Rho, della dinamica del citoscheletro e la modulazione delle reti MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando adesione, migrazione e proliferazione. Un’espressione o una segnalazione di EPHA7 deregolate sono state collegate ad alterazioni dei circuiti del neurosviluppo e a processi oncogeni, come la compromissione del controllo della crescita e il comportamento invasivo in molteplici contesti tumorali. L’editing del gene EPHA7 e gli strumenti di genomica funzionale supportano studi meccanicistici della segnalazione efrina–Eph, della fosforilazione e del traffico del recettore e del crosstalk tra vie di segnalazione in modelli neuronali, organoidi e sistemi di cellule tumorali.

Le particelle di attivazione lentivirale EphA7 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EPHA7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EphA7 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EPHA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EphA7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EPHA7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.