Plásmido Doble Nickase (h) EphA3: sc-401565-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EphA3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EphA3 (h) y el plásmido de doble nickasa EphA3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EPHA3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EphA3 Anticuerpo (D-2): sc-514209
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EphA3 | sc-401565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EphA3 | sc-401565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA3 codifica EphA3, una tirosina cinasa receptora de la red de señalización de efrina‑A que regula la comunicación célula–célula, el patrón tisular y la remodelación del citoesqueleto. Tras la unión a efrinas, EphA3 influye en una señalización bidireccional que converge con GTPasas de la familia Rho y con vías asociadas a MAPK y PI3K para modular la adhesión celular, la migración y la formación de fronteras. La desregulación de la expresión o de la señalización de EPHA3 se ha vinculado a programas de desarrollo alterados y a fenotipos aberrantes de crecimiento e invasión en múltiples contextos de cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la guía impulsada por receptores y las interacciones con el microambiente tumoral. En modelos celulares humanos, la señalización dependiente de EphA3 ofrece un sistema manejable para investigar la dinámica de señalización dependiente de contacto y las respuestas transcripcionales aguas abajo.
EphA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPHA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPHA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPHA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPHA3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.