EphA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401565-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA3 Double Nickase Plasmid (h) e il EphA3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPHA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EphA3 Antibody (D-2): sc-514209
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401565-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401565-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA3 codifica EphA3, una tirosin-chinasi recettoriale della rete di segnalazione ephrin-A che regola la comunicazione cellula–cellula, il patterning tissutale e il rimodellamento del citoscheletro. In seguito al legame con le efrine, EphA3 influenza una segnalazione bidirezionale che interseca le GTPasi della famiglia Rho e le vie associate a MAPK e PI3K, modulando adesione cellulare, migrazione e formazione di confini. Un’espressione o una segnalazione di EPHA3 deregolate sono state associate ad alterazioni dei programmi di sviluppo e a fenotipi anomali di crescita e invasione in diversi contesti oncologici, rendendolo un nodo utile per studiare la guida mediata da recettori e le interazioni con il microambiente tumorale. Nei modelli cellulari umani, la segnalazione dipendente da EphA3 offre un sistema gestibile per analizzare le dinamiche di segnalazione dipendenti dal contatto e le risposte trascrizionali a valle.
EphA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.