ENT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419988

Panoramica

Slc29a2 codifica il trasportatore equilibrativo di nucleosidi 2 (ENT2), un trasportatore di membrana plasmatica ampiamente espresso che media un flusso bidirezionale, dipendente dalla concentrazione, di nucleosidi purinici e pirimidinici quali adenosina e inosina. ENT2 contribuisce a regolare le vie di recupero (salvage) dei nucleosidi, le riserve intracellulari di nucleotidi e l’omeostasi dell’adenosina extracellulare, influenzando così la sintesi di DNA/RNA, l’energetica cellulare e la segnalazione purinergica. Nei sistemi murini, un’alterata attività di ENT2 è rilevante per studi sulle risposte allo stress metabolico, sulla segnalazione immunitaria e infiammatoria guidata dalla disponibilità di nucleosidi e sulla modulazione, mediata da trasportatori, dell’assorbimento di farmaci e analoghi dei nucleosidi. Slc29a2 è pertanto spesso analizzato in contesti che collegano il trasporto dei nucleosidi a proliferazione, differenziamento e omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc29a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc29a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc29a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ENT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc29a2 per lo studio della segnalazione di ENT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc29a2 critici per la funzione di ENT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc29a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ENT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ENT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc29a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ENT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ENT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc29a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc29a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.