Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Endo180 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403483
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Endo180 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Endo180, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Endo180 Antibody (B-10): sc-271148
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Endo180 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403483 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MRC2 codifica Endo180 (noto anche come uPARAP), un recettore endocitico transmembrana della famiglia dei recettori del mannosio che lega e internalizza il collagene per la degradazione lisosomiale. Endo180 collega il rimodellamento della matrice extracellulare all’adesione e alla migrazione cellulare regolando il turnover del collagene, la segnalazione associata alle integrine e le vie di traffico legate all’endocitosi. Grazie al suo ruolo nell’assorbimento del collagene e nella dinamica della matrice, Endo180 contribuisce al rimodellamento dello stroma e a fenotipi cellulari invasivi spesso studiati in ambito di biologia del cancro, fibrosi e riparazione tissutale. Un’attività deregolata di MRC2/Endo180 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi della matrice extracellulare e a cambiamenti del microambiente rilevanti per i meccanismi di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Endo180 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MRC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MRC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MRC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Endo180.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MRC2 per lo studio della segnalazione di Endo180, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MRC2 critici per la funzione di Endo180
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MRC2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Endo180 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Endo180 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MRC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Endo180 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Endo180 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MRC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MRC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.