ELOVL6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413125-LAC

ELOVL6 codifica un’elongasi localizzata nel reticolo endoplasmatico che catalizza passaggi limitanti della velocità nell’allungamento degli acidi grassi saturi e monoinsaturi a lunga catena, inclusa la conversione di specie C16 in C18. Modellando la composizione lipidica cellulare, ELOVL6 influenza la biofisica di membrana, l’omeostasi delle goccioline lipidiche e la segnalazione lipidica a valle, collegata all’accoppiamento glicolisi–lipogenesi e al metabolismo degli acidi grassi. Un’attività alterata di ELOVL6 è associata al rimodellamento metabolico osservato nella resistenza all’insulina, nella steatosi epatica e nella disregolazione della gestione dei lipidi nel tessuto adiposo e nel fegato, ed è stata studiata in contesti in cui la disponibilità di lipidi sostiene programmi proliferativi e infiammatori. Di conseguenza, ELOVL6 viene comunemente indagata per il suo ruolo nella regolazione, guidata dai lipidi, delle risposte allo stress degli organelli e nel crosstalk tra vie metaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale ELOVL6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ELOVL6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ELOVL6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ELOVL6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ELOVL6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ELOVL6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.