eIF4B Plasmide Double Nickase (h): sc-402494-NIC

EIF4B codifica eIF4B, un fattore accessorio di inizio della traduzione che potenzia l’attività di elicasi dell’RNA di eIF4A e favorisce il reclutamento dei ribosomi su mRNA strutturati durante l’inizio cap-dipendente. Attraverso le sue interazioni con il complesso eIF4F e la fosforilazione regolatoria a valle della segnalazione PI3K–AKT–mTOR e MAPK, eIF4B contribuisce a modulare la resa traduttiva durante la crescita, le risposte allo stress e la progressione del ciclo cellulare. Un’alterata espressione o uno stato di attivazione anomalo di EIF4B sono stati associati a programmi di sintesi proteica deregolati che contribuiscono alla segnalazione oncogenica e a una proliferazione cellulare aberrante. In quanto nodo di collegamento tra vie di segnalazione e traduzione selettiva di mRNA, EIF4B è spesso studiato nei meccanismi che controllano la proteostasi, la dinamica dei granuli di stress e la regolazione dell’apoptosi e del metabolismo dipendente dalla traduzione.

eIF4B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.