Plásmido CRISPR de Activación (m) ECM2: sc-436571-ACT

El gen murino **Ecm2** codifica la proteína 2 de la matriz extracelular (ECM2), un componente secretado asociado a la matriz implicado en la organización de la arquitectura del estroma y en la modulación de las interacciones célula–matriz. ECM2 contribuye a procesos de remodelación de la matriz extracelular que influyen en la adhesión y la migración celulares, así como en la morfogénesis tisular, y se relaciona con vías que regulan la actividad de los fibroblastos y la integridad de la membrana basal. Los cambios en la composición de la matriz y la dinámica matricial vinculada a ECM2 son relevantes en estudios de remodelación tipo fibrosis, reparación de heridas y biología del microambiente tumoral, donde las señales del estroma moldean los fenotipos celulares. Por ello, la expresión de **Ecm2** se analiza con frecuencia en modelos de homeostasis del tejido conectivo y de cambios del medio extracelular asociados a la inflamación.

ECM2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ecm2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ECM2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ecm2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ecm2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ECM2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ecm2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ECM2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ECM2 en células tumorales con expresión de Ecm2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.