DSCR 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404157-ACT

PSMG1 (annotato anche come DSCR2 in contesti legacy) codifica uno chaperone di assemblaggio del proteasoma che supporta la formazione della particella core 20S, influenzando così la capacità del sistema ubiquitina–proteasoma e l’omeostasi proteica globale. Regolando la biogenesi del proteasoma, PSMG1 incide su vie legate alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e al processamento dell’antigene tramite presentazione su MHC di classe I. Alterazioni dell’assemblaggio del proteasoma e squilibri della proteostasi sono stati associati a fenotipi di neuro-sviluppo e a disturbi da dosaggio cromosomico, inclusi contesti pertinenti alla regione critica della sindrome di Down, oltre a meccanismi più ampi di suscettibilità allo stress cellulare. Queste caratteristiche rendono PSMG1/DSCR2 un nodo utile per studiare la segnalazione dipendente dalla proteostasi e l’adattamento trascrittomico nelle cellule umane.

DSCR 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMG1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DSCR 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMG1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DSCR 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMG1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DSCR 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DSCR 2 nelle cellule tumorali con espressione di PSMG1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.