DRP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400459-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DRP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DRP1 Double Nickase Plasmid (h) e il DRP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNM1L. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DRP1 Antibody (C-5): sc-271583
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DRP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400459-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DRP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400459-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNM1L codifica la proteina 1 correlata alla dinammina (DRP1), una grande GTPasi che orchestra la fissione mitocondriale assemblandosi sulla membrana mitocondriale esterna e restringendo le membrane in coordinamento con proteine adattatrici quali FIS1, MFF e MID49/51. Attraverso la regolazione dell’architettura della rete mitocondriale, DRP1 influenza la fosforilazione ossidativa, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, la distribuzione del DNA mitocondriale e il controllo di qualità degli organelli tramite mitofagia. Le dinamiche dipendenti da DRP1 sono strettamente accoppiate alla segnalazione dell’apoptosi e all’adattamento metabolico, collegando l’attività di DNM1L a vie che regolano le risposte cellulari allo stress e l’omeostasi bioenergetica. Una funzione alterata di DRP1 e la frammentazione mitocondriale sono associate a fenotipi neurosviluppo e neurodegenerativi, disfunzioni cardiometaboliche e programmi di sopravvivenza delle cellule tumorali, rendendo DNM1L un bersaglio comune per studi meccanicistici della biologia mitocondriale.
DRP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNM1L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNM1L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNM1L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNM1L interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.