DRAK2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404787-ACT

STK17B codifica DRAK2 (DAPK-related apoptosis-inducing kinase 2), una chinasi serina/treonina che modula le soglie di attivazione dei linfociti e integra i segnali a valle del recettore delle cellule T (TCR). DRAK2 è stata collegata alla regolazione dell’apoptosi, alle risposte allo stress mitocondriale e al controllo, mediato dalla fosforilazione, di programmi trascrizionali che modellano la sopravvivenza e la funzione delle cellule immunitarie. In virtù di questi ruoli, STK17B viene spesso studiato nei circuiti che governano la tolleranza immunitaria, la segnalazione infiammatoria e l’adattamento cellulare allo stress. Un’attività di DRAK2 disregolata e specifici pattern di espressione di STK17B sono stati associati a meccanismi patologici immunomediati e a cambiamenti dipendenti dal contesto nella sopravvivenza cellulare osservati nella ricerca su cancro e infiammazione.

DRAK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STK17B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DRAK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STK17B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STK17B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DRAK2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STK17B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DRAK2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DRAK2 nelle cellule tumorali con espressione di STK17B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.