DNA pol γ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407382

Panoramica

POLG2 codifica la subunità 2 della DNA polimerasi gamma, un fattore accessorio che si lega alla subunità catalitica POLG per aumentare la processività e sostenere la replicazione e la riparazione del DNA mitocondriale (mtDNA) ad alta fedeltà. Questa proteina opera nell’ambito della biologia dei nucleoidi mitocondriali ed è fondamentale per mantenere il numero di copie dell’mtDNA, l’integrità del genoma e la capacità di fosforilazione ossidativa. L’alterazione delle dinamiche replicative dipendenti da POLG2 può contribuire alla deplezione di mtDNA o all’accumulo di delezioni, collegando l’instabilità del genoma mitocondriale a fenotipi di malattie mitocondriali neuromuscolari e multisistemiche. POLG2 è quindi ampiamente studiato nei pathway che regolano la biogenesi mitocondriale, le risposte allo stress replicativo e la segnalazione guidata dal metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLG2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLG2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLG2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DNA pol γ2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLG2 per lo studio della segnalazione di DNA pol γ2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLG2 critici per la funzione di DNA pol γ2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLG2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DNA pol γ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DNA pol γ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLG2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DNA pol γ2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DNA pol γ2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLG2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLG2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.