Dexras1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422604

Panoramica

Rasd1 codifica Dexras1, una piccola GTPasi correlata a Ras che funge da interruttore di segnalazione collegando segnali extracellulari a vie intracellulari di secondi messaggeri nelle cellule murine. Dexras1 è stata implicata nella modulazione della segnalazione delle proteine G eterotrimeriche e delle risposte dipendenti dall’AMPc, e partecipa a programmi associati all’attività neuronale influenzati dai glucocorticoidi e dalla segnalazione correlata all’ossido nitrico. Attraverso questi ruoli, Rasd1 può modulare gli output trascrizionali e l’adattamento cellulare allo stress e agli input ormonali. La deregolazione della segnalazione Rasd1/Dexras1 è stata studiata nel contesto della regolazione neuroendocrina e di fenotipi del sistema nervoso, rendendola rilevante per indagini meccanicistiche sulla regolazione genica dipendente dalla segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dexras1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rasd1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rasd1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rasd1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dexras1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rasd1 per lo studio della segnalazione di Dexras1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rasd1 critici per la funzione di Dexras1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rasd1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dexras1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Dexras1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rasd1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dexras1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Dexras1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rasd1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rasd1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.