DEC-205 Plasmide Double Nickase (h): sc-417220-NIC

LY75 codifica per DEC-205 (CD205), un recettore endocitico di tipo lectinico C altamente espresso da sottopopolazioni di cellule dendritiche, che cattura antigeni glicosilati e li indirizza ai compartimenti endosomiali e lisosomiali per la processazione. Attraverso l’assorbimento mediato da clatrina e il traffico vescicolare, DEC-205 sostiene la presentazione tramite MHC di classe II e può influenzare le vie di cross-presentazione che modellano l’innesco della risposta immunitaria adattativa. L’attivazione di DEC-205 si interseca con programmi di riconoscimento dei pattern e con programmi guidati dalle citochine che regolano maturazione delle cellule dendritiche, tolleranza e polarizzazione dei linfociti T. Un’alterata gestione dell’antigene e la disfunzione delle cellule dendritiche che coinvolgono LY75 sono rilevanti per studi su autoimmunità, infiammazione cronica, biologia delle infezioni e microambienti immunitari tumorali.

DEC-205 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LY75 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LY75. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LY75. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LY75 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.