D53 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423478

Panoramica

Tpd52l1 codifica D53, una proteina citosolica della famiglia delle tumor protein D52-like, associata alla regolazione del traffico di membrana, della dinamica delle vescicole e dell’organizzazione del citoscheletro. Nelle cellule murine, D53 è collegata a processi che coordinano secrezione, polarità cellulare e proliferazione, ed è stato riportato che interagisca con programmi di segnalazione che modellano il comportamento di cellule epiteliali e stromali. Un’espressione alterata dei membri della famiglia D52 è stata osservata in contesti di trasformazione oncogenica e di controllo anomalo della crescita, rendendo Tpd52l1 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di progressione del ciclo cellulare, migrazione e rimodellamento adattativo allo stress. La perturbazione genetica di Tpd52l1 supporta studi sulla connettività tra i pathway del macchinario di traffico, la segnalazione mitogenica e fenotipi rilevanti per la biologia tumorale e l’omeostasi dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO D53 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpd52l1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpd52l1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpd52l1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina D53.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpd52l1 per lo studio della segnalazione di D53, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpd52l1 critici per la funzione di D53
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpd52l1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal D53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal D53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpd52l1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal D53 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR D53 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpd52l1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpd52l1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.