CYPOR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422345-LAC

Il gene murino **Por** codifica la citocromo P450 ossidoreduttasi (CYPOR), donatore obbligato di elettroni per gli enzimi citocromo P450 microsomiali che catalizzano il metabolismo ossidativo di xenobiotici, steroidi, acidi grassi e retinoidi. CYPOR trasferisce equivalenti riducenti dall’NADPH ai CYP, collegando l’equilibrio redox cellulare alle vie di detossificazione associate al reticolo endoplasmatico e all’omeostasi lipidica. Regolando le reazioni di bioattivazione ed eliminazione dipendenti dai CYP, Por influenza le risposte allo stress ossidativo e la capacità metabolica specifica dei tessuti nel fegato e negli organi extraepatici. Un’attività di CYPOR deregolata è quindi rilevante per studi sulle interazioni farmaco–farmaco, sulle alterazioni della segnalazione endocrina e lipidica e sui fenotipi metabolici associati a una funzione CYP modificata.

Le particelle di attivazione lentivirale CYPOR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Por in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CYPOR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Por, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CYPOR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Por e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.