Plásmido CRISPR de Activación (h) CUL-3: sc-416925-ACT

El gen humano **CUL3** codifica la cullina-3 (CUL-3), un andamio central de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina **CRL3** que conectan adaptadores de sustrato con dominio BTB con **RBX1** para la transferencia de ubiquitina y la degradación proteasomal. Mediante el recambio selectivo de proteínas reguladoras, CUL-3 influye en la proteostasis, la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés oxidativo y la organización del citoesqueleto, incluidas vías vinculadas a la señalización **KEAP1–NRF2**. La actividad CRL3 desregulada puede alterar la homeostasis redox y el control de los puntos de control, lo que convierte a CUL3 en un nodo frecuentemente estudiado en la biología del cáncer y en programas de adaptación al estrés. Las alteraciones en las redes de ubiquitinación dependientes de CUL3 también se utilizan para modelar mecanismos relevantes para fenotipos neurodel desarrollo y cardiovasculares en sistemas celulares.

CUL-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CUL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CUL-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CUL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CUL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CUL-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CUL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CUL-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CUL-3 en células tumorales con expresión de CUL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.