CRY2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403171-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRY2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRY2 Double Nickase Plasmid (h) e il CRY2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRY2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRY2 Antibody (3H4): sc-293263
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRY2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRY2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRY2 codifica la criptocromina 2, una flavoproteina componente del nucleo dell’orologio circadiano, che agisce principalmente come repressore trascrizionale all’interno del circuito di retroazione CLOCK–BMAL1. Associandosi alle proteine PER e modulando la trascrizione guidata dagli E-box, CRY2 contribuisce a coordinare le oscillazioni giornaliere dell’espressione genica che influenzano il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA, il metabolismo e la segnalazione endocrina. L’attività di CRY2 è collegata a meccanismi di turnover proteico dipendente dall’ubiquitina e a vie di fosforilazione che regolano periodo e ampiezza dei ritmi circadiani. La disregolazione dei programmi circadiani associati a CRY2 è stata implicata in fenotipi legati al sonno e alla cronobiologia ed è spesso studiata nel contesto di disturbi metabolici e proliferativi, in cui l’alterazione dell’orologio compromette l’omeostasi cellulare.
CRY2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRY2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRY2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRY2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRY2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.