CRP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409601-ACT

CSRP2 codifica la proteina 2 ricca di cisteina e glicina (CRP2), un adattatore contenente domini LIM che coordina l’organizzazione del citoscheletro di actina e programmi trascrizionali legati alla forma cellulare, alla motilità e alla differenziazione. CRP2 è particolarmente espressa in contesti associati alla muscolatura liscia e partecipa alla meccanotrasduzione collegando la dinamica del citoscheletro alla regolazione genica nucleare, incluse vie che coinvolgono SRF/MRTF e altri co-regolatori trascrizionali. Attraverso queste funzioni, CSRP2 influenza il rimodellamento vascolare e fenotipi di migrazione cellulare rilevanti per la fibrosi, la biologia cardiovascolare e i processi stromali associati al cancro e metastatici. Un’espressione deregolata di CSRP2 è stata riportata in molteplici dataset di malattia, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per lo studio della segnalazione citoscheletrica e dei circuiti di regolazione genica.

CRP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSRP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSRP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSRP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSRP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRP2 nelle cellule tumorali con espressione di CSRP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.