CPSF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403190

Panoramica

CPSF4 (cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 4) codifica un componente centrale del macchinario di processamento dell’estremità 3′ dell’mRNA, che riconosce i segnali di poliadenilazione e coordina il taglio e l’aggiunta della coda poli(A). Attraverso il suo ruolo nel complesso di taglio e poliadenilazione, CPSF4 contribuisce a regolare la maturazione dei trascritti, la poliadenilazione alternativa e l’output dell’espressione genica, influenzando la stabilità e la traduzione dell’mRNA. L’alterazione dei fattori coinvolti nel processamento dell’estremità 3′ può spostare l’utilizzo dei siti di poli(A) e riprogrammare in modo ampio le reti trascrizionali, collegando la biologia associata a CPSF4 al controllo del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e ai programmi di differenziamento. Un processamento dell’RNA deregolato e la poliadenilazione alternativa sono frequentemente osservati nel cancro e in altri contesti proliferativi o di neurosviluppo, rendendo CPSF4 un nodo rilevante per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CPSF4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CPSF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CPSF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CPSF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CPSF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CPSF4 per lo studio della segnalazione di CPSF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CPSF4 critici per la funzione di CPSF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CPSF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CPSF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CPSF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CPSF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CPSF4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CPSF4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CPSF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CPSF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.