Cox-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422489-LAC

Il gene murino Ptgs2 codifica la cicloossigenasi-2 (Cox-2), un enzima inducibile e limitante della velocità che converte l’acido arachidonico in prostaglandina H2, fornendo il pool di precursori per PGE2 e altri prostanoidi bioattivi. L’espressione di Cox-2 viene rapidamente aumentata da citochine infiammatorie, fattori di crescita e segnali microbici attraverso vie che includono NF-κB, MAPK/ERK e AP-1, collegando gli stimoli ambientali alla produzione di mediatori lipidici. Attraverso la segnalazione delle prostaglandine, Ptgs2 influenza il tono vascolare, la nocicezione, l’omeostasi epiteliale e la regolazione delle risposte immunitarie innate e adattative. Un’attività di Cox-2 deregolata è ampiamente studiata in contesti di infiammazione cronica, microambienti associati ai tumori e modelli di lesione tissutale, in cui la segnalazione guidata dai prostanoidi rimodella proliferazione, programmi angiogenici e reclutamento di cellule immunitarie.

Le particelle di attivazione lentivirale Cox-2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ptgs2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Cox-2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ptgs2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Cox-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ptgs2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.