Cox-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400072-ACT

PTGS2 codifica la cicloossigenasi-2 (Cox-2), un enzima inducibile associato al reticolo endoplasmatico e all’involucro nucleare, che converte l’acido arachidonico in prostaglandina H2, precursore obbligato di diversi prostanoidi. Cox-2 viene rapidamente sovraregolata da citochine infiammatorie, fattori di crescita e stimoli oncogenici e integra segnali provenienti da NF-κB, MAPK/ERK, JAK/STAT e AP-1 per modulare i programmi genici dell’infiammazione. Attraverso la prostaglandina E2 e mediatori lipidici correlati, PTGS2 influenza il tono vascolare, la funzione piastrinica, le risposte di dolore e febbre, il rimodellamento della barriera epiteliale e il reclutamento di cellule immunitarie. Un’espressione deregolata di PTGS2 è frequentemente osservata nell’infiammazione cronica e in molteplici contesti tumorali, dove è associata ad alterazioni della proliferazione cellulare, della segnalazione angiogenica e dei meccanismi di evasione immunitaria.

Cox-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTGS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cox-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTGS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTGS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cox-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTGS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cox-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cox-2 nelle cellule tumorali con espressione di PTGS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.