COLEC11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413098-ACT

COLEC11 codifica la collectina-11, una lectina di tipo C secreta coinvolta nel riconoscimento di pattern, che si lega a motivi carboidratici presenti sui microbi e a strutture proprie alterate per avviare risposte immunitarie innate. Attraverso interazioni con le proteasi MASP, COLEC11 partecipa all’attivazione del complemento tramite la via lectinica, promuovendo l’opsonizzazione e la successiva segnalazione infiammatoria. Oltre alla difesa dell’ospite, COLEC11 contribuisce a processi di sviluppo quali la migrazione cellulare e la modellazione dei tessuti, in linea con la sua espressione in molteplici contesti embrionali. Un’attività disregolata della via lectinica e varianti di COLEC11 sono state associate a una maggiore suscettibilità a condizioni infettive e infiammatorie e a fenotipi congeniti dello sviluppo, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della biologia mediata dal complemento.

COLEC11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COLEC11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

COLEC11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COLEC11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COLEC11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di COLEC11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COLEC11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da COLEC11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via COLEC11 nelle cellule tumorali con espressione di COLEC11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.