Plasmide CRISPR d'Activation (h) COLEC11: sc-413098-ACT

COLEC11 code la collectine-11, une lectine de type C sécrétée impliquée dans la reconnaissance de motifs (pattern-recognition) qui se lie à des motifs glucidiques présents sur les microbes ainsi qu’à des structures du soi altérées, afin d’initier des réponses immunitaires innées. Par ses interactions avec les protéases MASP, COLEC11 participe à l’activation du complément via la voie des lectines, favorisant l’opsonisation et la signalisation inflammatoire en aval. Au-delà de la défense de l’hôte, COLEC11 contribue à des processus développementaux tels que la migration cellulaire et la structuration des tissus, ce qui concorde avec son expression dans de multiples contextes embryonnaires. Une activité dérégulée de la voie des lectines et des variations de COLEC11 ont été associées à une susceptibilité accrue aux affections infectieuses et inflammatoires, ainsi qu’à des phénotypes développementaux congénitaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie médiée par le complément.

COLEC11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COLEC11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COLEC11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COLEC11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COLEC11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COLEC11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COLEC11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COLEC11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COLEC11 dans les cellules tumorales présentant une expression de COLEC11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.