CIRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419664

Panoramica

Cirbp codifica la proteina legante l’RNA inducibile dal freddo (CIRP), uno chaperone dell’RNA sensibile allo stress che modula la stabilità, il trasporto e la traduzione degli mRNA. Nelle cellule murine, CIRP è indotta da ipotermia, irradiazione UV, ipossia e stress ossidativo, e contribuisce alla regolazione genica post-trascrizionale all’interno dei granuli di stress e di complessi ribonucleoproteici correlati. Le vie associate a CIRP intersecano le risposte cellulari allo stress, la segnalazione infiammatoria e la regolazione circadiana e metabolica attraverso il controllo selettivo di trascritti bersaglio. Un’attività di CIRP deregolata è stata associata ad alterazioni delle risposte immunitarie e allo stress tissutale, rendendo Cirbp un locus utile per studi meccanicistici in ambito di infiammazione, neurobiologia e adattamento allo stress rilevante per il cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CIRP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cirbp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cirbp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cirbp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CIRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cirbp per lo studio della segnalazione di CIRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cirbp critici per la funzione di CIRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cirbp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CIRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CIRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cirbp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CIRP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CIRP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cirbp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cirbp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.