Cerebellin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407032

Panoramica

CBLN1 codifica la cerebellina 1, una glicoproteina secreta arricchita nel sistema nervoso centrale che agisce come organizzatore sinaptico, sostenendo la formazione e il mantenimento delle sinapsi eccitatorie. La cerebellina 1 partecipa a complessi di adesione trans-sinaptica che accoppiano le specializzazioni presinaptiche e postsinaptiche, modellando la connettività sinaptica e la neurotrasmissione nel cervelletto e in circuiti correlati. Attraverso queste interazioni influenza lo sviluppo neuronale, la plasticità sinaptica e i processi di raffinamento dei circuiti, centrali per la coordinazione motoria e l’apprendimento. Un’alterata espressione di CBLN1 o una disorganizzazione sinaptica mediata da cerebellina è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulle sinaptopatie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cerebellin 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CBLN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CBLN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CBLN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cerebellin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CBLN1 per lo studio della segnalazione di Cerebellin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CBLN1 critici per la funzione di Cerebellin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CBLN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cerebellin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cerebellin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CBLN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cerebellin 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cerebellin 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CBLN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CBLN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.