CENP-F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402178

Panoramica

CENPF codifica CENP‑F, una grande proteina associata al cinetocore che si accumula nella tarda fase G2 e in mitosi e coordina l’allineamento dei cromosomi, la segnalazione del checkpoint del fuso e la corretta segregazione durante la divisione cellulare. CENP‑F contribuisce all’ancoraggio dei microtubuli ai cinetocori e supporta la funzione del centrosoma e la dinamica del fuso, collegandosi così ai principali processi della progressione mitotica e alle vie di stabilità del genoma. La disregolazione dell’espressione o della localizzazione di CENPF è associata a instabilità cromosomica e a un’alterata capacità proliferativa, caratteristiche spesso investigate in biologia del cancro. CENP‑F funge anche da marcatore dello stato del ciclo cellulare ed è studiata per i suoi ruoli nell’architettura nucleare e nelle risposte allo stress mitotico nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-F (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CENPF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CENPF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CENPF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CENP-F.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CENPF per lo studio della segnalazione di CENP-F, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CENPF critici per la funzione di CENP-F
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CENPF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CENP-F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CENP-F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CENPF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CENP-F Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CENP-F (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CENPF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CENPF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.