Cdx1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402522-LAC

Il gene umano CDX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox Cdx1, un regolatore della patterning antero-posteriore e della differenziazione dell’epitelio intestinale. Cdx1 integra input di segnalazione dello sviluppo, incluse le vie Wnt/β-catenina e quelle correlate a BMP, per controllare programmi trascrizionali che governano proliferazione, specificazione di linea e mantenimento dell’identità intestinale. Un’alterata espressione di CDX1 è stata associata a una maturazione epiteliale disregolata e alla metaplasia intestinale, ed è spesso studiata nel contesto della biologia dei tumori colorettali e dei meccanismi delle malattie della mucosa. In quanto regolatore trascrizionale che lega il DNA, Cdx1 rappresenta un nodo maneggevole per analizzare le reti di regolazione genica che determinano il destino epiteliale e le funzioni associate alla barriera.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdx1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CDX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdx1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CDX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Cdx1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CDX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.