CDCP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430933

Panoramica

Cdcp1 codifica CDCP1, una glicoproteina transmembrana a singolo passaggio arricchita sulla superficie cellulare, dove funge da hub di impalcatura e di segnalazione per vie sensibili all’adesione e allo stress. CDCP1 va incontro a fosforilazione su tirosina e interagisce con le chinasi della famiglia Src e con la segnalazione mediata da PKC, influenzando il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare, la sopravvivenza e le interazioni con la matrice extracellulare. Nei sistemi murini, l’attività di Cdcp1 è stata collegata al comportamento delle cellule epiteliali e stromali, alla resistenza all’anoikis e a una regolazione dipendente dal contesto dei fenotipi invasivi. Una segnalazione di CDCP1 deregolata è spesso studiata in modelli di progressione tumorale, programmi associati alla metastasi e microambienti infiammatori, rendendola rilevante per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CDCP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdcp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdcp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdcp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CDCP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdcp1 per lo studio della segnalazione di CDCP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cdcp1 critici per la funzione di CDCP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdcp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CDCP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CDCP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdcp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CDCP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CDCP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdcp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdcp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.