CD74 Plasmide Double Nickase (h): sc-400279-NIC

CD74 codifica la catena invariante (Ii), una proteina transmembrana di tipo II che funge da chaperone essenziale per le molecole di MHC di classe II nelle cellule presentanti l'antigene. Occupando la tasca di legame per il peptide nel reticolo endoplasmatico e indirizzando il traffico dell'MHC II attraverso i compartimenti endosomiali, CD74 favorisce il caricamento dei peptidi e la loro presentazione alle cellule T CD4+ nell'ambito della segnalazione immunitaria adattativa. CD74 funge anche da componente recettoriale di superficie cellulare per il fattore inibitore della migrazione dei macrofagi (MIF), collegandolo a vie a valle come NF-κB e MAPK che regolano infiammazione, sopravvivenza cellulare e attivazione delle cellule immunitarie. Un'espressione e una segnalazione deregolate di CD74 sono state associate a patologie immunomediate e vengono frequentemente studiate nel contesto delle neoplasie ematologiche e di microambienti infiammatori.

CD74 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD74 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD74. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD74. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD74 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.