CD69 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-416315-LAC-2

Il gene umano CD69 codifica CD69, un recettore lectinico di tipo C transmembrana di tipo II, rapidamente indotto su cellule T, cellule B, cellule NK e altri leucociti attivati, dove funge da marcatore precoce di attivazione e da modulatore della segnalazione immunitaria. CD69 influenza il traffico dei linfociti e la loro ritenzione nei tessuti regolando il recettore 1 della sfingosina-1-fosfato (S1PR1) e contribuisce a programmi a valle che incidono sulla produzione di citochine, sulla proliferazione e sulla dinamica della sinapsi immunologica. Grazie ai suoi ruoli nell’attivazione immunitaria, nell’immunità mucosale e dei tessuti residenti e nelle reti di segnalazione infiammatoria, CD69 è implicato nella disregolazione immunitaria osservata nell’autoimmunità, nell’infiammazione cronica, nelle infezioni e nei microambienti immunitari tumorali. L’editing genetico o la perturbazione funzionale di CD69 in cellule umane supporta studi meccanicistici sui circuiti trascrizionali dipendenti dall’attivazione, sul controllo della migrazione/egresso e sulla fenotipizzazione delle cellule immunitarie in modelli di ricerca in vitro ed ex vivo.

Le particelle di attivazione lentivirale CD69 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CD69 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD69 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CD69, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD69. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CD69 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.