Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CD42d Plasmide Double Nickase (h): sc-404793-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD42d Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD42d Double Nickase Plasmid (h) e il CD42d Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GP5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD42d Antibody (G-11): sc-271662
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD42d Plasmide Double Nickase (h) | sc-404793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD42d Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GP5 codifica la glicoproteina piastrinica V (CD42d), una componente del complesso recettoriale GPIb-IX-V presente sulla superficie delle piastrine, che coopera con il legame al fattore di von Willebrand per mediare l’aggancio (“tethering”) piastrinico in condizioni di elevato shear e sostenere l’attivazione piastrinica dipendente dalla trombina. Attraverso queste interazioni, CD42d contribuisce all’adesione emostatica, alla meccanotrasduzione e agli eventi di segnalazione a valle che coordinano il rilascio dei granuli piastrinici e l’attivazione delle integrine. Un’espressione o una funzione alterata del complesso GPIb-IX-V è associata a difetti ereditari di adesione piastrinica e può influenzare fenotipi trombotici ed emorragici, rendendo GP5 un locus utile per analizzare la biologia piastrinica e i processi infiammatori legati alla coagulazione.
CD42d Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GP5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GP5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GP5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GP5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.