CD4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419557

Panoramica

Cd4 codifica CD4, una glicoproteina transmembrana di tipo I espressa prevalentemente sulle cellule T helper e su un sottogruppo di timociti, dove funge da co-recettore che stabilizza il riconoscimento del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe II da parte del TCR e promuove la segnalazione dipendente da Lck. Attraverso la sua associazione con il complesso del TCR, CD4 contribuisce alla selezione timica, alle soglie di attivazione delle cellule T e alle vie a valle che orientano la differenziazione verso linee effettrici e regolatorie. Alterazioni della segnalazione dipendente da CD4 e dell’omeostasi delle cellule T CD4+ sono centrali nella disregolazione immunitaria in contesti autoimmuni e infiammatori, e i cambiamenti nella funzione delle cellule T CD4+ sono rilevanti anche per l’immunologia dei tumori e per le interazioni ospite–patogeno. Nei modelli murini, la perturbazione di Cd4 è ampiamente utilizzata per analizzare la presentazione dell’antigene, la polarizzazione guidata dalle citochine e il comportamento delle reti immunitarie adattative in vivo e in vitro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd4 per lo studio della segnalazione di CD4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd4 critici per la funzione di CD4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.