CaMKII gamma Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400681-ACT

Il gene umano **CAMK2G** codifica **CaMKII gamma**, una chinasi serina/treonina dipendente da **Ca2+/calmodulina** che traduce i transitori intracellulari di calcio in programmi di fosforilazione che regolano la plasticità sinaptica, l’accoppiamento eccitazione–trascrizione, la dinamica del citoscheletro e il traffico vescicolare. CaMKII gamma partecipa alla segnalazione mediata da CaMK, con effetti a valle sulla funzione dei canali ionici, sulle risposte trascrizionali collegate a CREB e sul cross-talk con le vie MAPK e PI3K/AKT. In contesti non neuronali, **CAMK2G** contribuisce a proliferazione, migrazione e risposte allo stress regolate dal calcio, supportando ruoli ampi nel controllo dello stato cellulare. Un’attività CaMKII e una segnalazione del calcio deregolate sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, oltre che a reti di segnalazione alterate nella biologia del cancro, rendendo **CAMK2G** un nodo utile per studi meccanicistici.

CaMKII gamma Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAMK2G senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CaMKII gamma Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAMK2G nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAMK2G, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CaMKII gamma. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAMK2G nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CaMKII gamma nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CaMKII gamma nelle cellule tumorali con espressione di CAMK2G silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.