Calregulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400775

概要

CALRはカルレギュリンをコードしており、カルレギュリンは多機能な小胞体（ER）シャペロンであると同時に、高容量のCa²⁺結合タンパク質として、タンパク質フォールディングの品質管理および細胞内カルシウム恒常性を支えています。カルレギュリンはカルネキシン／カルレギュリンサイクルに関与し、糖タンパク質の成熟とER内保持を協調させるほか、ERストレスシグナル伝達やアンフォールドタンパク質応答（UPR）にも寄与します。ER以外でも、CALRはMHCクラスIの組み立てを介して抗原提示に影響し、インテグリン関連過程を通じて細胞接着や遊走を調節し、さらにCa²⁺依存性シグナル伝達経路とも連関します。CALR活性の破綻は、血液腫瘍および固形腫瘍を含む多様な疾患状況において、プロテオスタシスや免疫シグナルの変調と関連づけられており、ER機能と細胞状態制御の機構研究における有用な結節点となっています。

Calregulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCALR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CALR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CALRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Calregulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Calregulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CALR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Calregulinの機能に不可欠なCALRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CALRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Calregulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCalregulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CALR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Calregulin HDRプラスミド（h）および Calregulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCALRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCALR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。