Btk Plasmide Double Nickase (h): sc-400603-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Btk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Btk Double Nickase Plasmid (h) e il Btk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BTK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Btk Antibody (E-9): sc-28387
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Btk Plasmide Double Nickase (h) | sc-400603-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Btk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400603-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La tirosina chinasi di Bruton (BTK; Btk) è una chinasi della famiglia Tec non associata a recettori, che trasduce segnali a valle del recettore delle cellule B e di molteplici immunorecettori, collegando gli input di attivazione alla fosfolipasi Cγ2, al flusso di calcio, e alle vie di segnalazione MAPK, PI3K–AKT e NF-κB. Nelle cellule ematopoietiche umane, BTK contribuisce a coordinare lo sviluppo delle cellule B, l’attivazione indotta dall’antigene, la produzione di citochine e le risposte dei recettori dell’immunità innata nelle linee mieloidi. Una segnalazione di BTK deregolata è implicata nella disfunzione immunitaria e contribuisce a programmi patogeni di sopravvivenza e attivazione in diverse neoplasie delle cellule B, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della segnalazione linfocitaria. BTK interagisce inoltre con vie che controllano l’adesione e la migrazione cellulare, supportando la ricerca sul traffico delle cellule immunitarie e sulle interazioni con il microambiente.
Btk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BTK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BTK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BTK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BTK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.