BDH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405825-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BDH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BDH1 Double Nickase Plasmid (h) e il BDH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BDH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BDH1 Antibody (G-5): sc-514413
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BDH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BDH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BDH1 codifica la 3-idrossibutirrato deidrogenasi mitocondriale 1, un enzima NAD+/NADH-dipendente che catalizza l’interconversione tra acetoacetato e D-β-idrossibutirrato nel metabolismo dei corpi chetonici. Regolando il bilancio redox cellulare e l’utilizzo dei chetoni, BDH1 collega la disponibilità di nutrienti alla produzione energetica mitocondriale e all’apporto di acetil-CoA per processi biosintetici e di segnalazione a valle. L’attività di BDH1 è quindi rilevante per la flessibilità metabolica nei diversi tessuti, in particolare in condizioni di digiuno, dieta ricca di grassi o ipossia, che spostano la dipendenza verso i corpi chetonici. Alterazioni dell’espressione o della funzione di BDH1 sono state investigate in contesti di disregolazione metabolica e metabolismo tumorale, in cui vie mitocondriali riprogrammate e l’omeostasi redox possono influenzare il fenotipo cellulare.
BDH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BDH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BDH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BDH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BDH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.