Bcl-x_S/L Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-400170-LAC-2

Il gene umano BCL2L1 codifica le isoforme Bcl-xS e Bcl-xL, regolatori della famiglia BCL-2 generati tramite splicing alternativo che modulano la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna e l’attivazione delle caspasi bilanciando l’attività anti-apoptotica di Bcl-xL e quella pro-apoptotica di Bcl-xS. Le proteine Bcl-x integrano segnali di sopravvivenza e di stress lungo la via intrinseca dell’apoptosi, intersecando la segnalazione di p53, i programmi di sopravvivenza mediati da MAPK/AKT, l’omeostasi del calcio e l’autofagia/mitofagia per determinare le decisioni sul destino cellulare e la dinamica mitocondriale. Un’espressione o uno splicing deregolati di BCL2L1 sono frequentemente associati a soglie apoptotiche alterate nel cancro, nelle condizioni infiammatorie e nella neurodegenerazione, dove variazioni nel rapporto tra isoforme possono influenzare la resistenza alla morte cellulare e l’omeostasi tissutale. L’editing genetico di BCL2L1 consente studi meccanicistici della funzione specifica delle isoforme, del controllo dello splicing e delle interazioni proteina–proteina con i fattori BH3-only, supportando screening di genomica funzionale, l’analisi delle vie di segnalazione e lo sviluppo di modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Bcl-xS/L (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BCL2L1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Bcl-xS/L (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BCL2L1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Bcl-xS/L. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BCL2L1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.