BCAP Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429913-ACT

Il gene murino **Pik3ap1** codifica **BCAP** (B cell adaptor for PI3K), un adattatore citoplasmatico che collega la segnalazione mediata dagli immunorecettori all’attivazione della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K). BCAP integra segnali a monte provenienti dal recettore delle cellule B e dai recettori dell’immunità innata con la via **PI3K–AKT**, modulando programmi trascrizionali a valle che influenzano l’attivazione dei linfociti, la sopravvivenza e la riprogrammazione metabolica. Grazie a queste funzioni, **Pik3ap1** viene utilizzato per studiare l’integrazione dei segnali tra diverse vie immunitarie, inclusa l’interazione (crosstalk) con risposte dipendenti da **NF-κB** e **MAPK**. La disregolazione dell’architettura della via PI3K e della propagazione del segnale mediata da adattatori è rilevante in modelli di disfunzione immunitaria e infiammazione, a supporto della ricerca meccanicistica in immunologia e nella segnalazione di sistema.

BCAP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pik3ap1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BCAP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pik3ap1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pik3ap1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BCAP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pik3ap1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BCAP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BCAP nelle cellule tumorali con espressione di Pik3ap1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.