B23/Nucleophosmin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421943

Panoramica

Il gene murino **Npm1** codifica **B23/Nucleofosmina**, una fosfoproteina nucleolare multifunzionale che si sposta tra nucleolo, nucleo e citoplasma per coordinare la biogenesi dei ribosomi, il processamento dell’rRNA e l’architettura nucleolare. La nucleofosmina partecipa al controllo del ciclo cellulare e alle risposte allo stress attraverso interazioni con reti regolatorie chiave, tra cui la segnalazione p53/ARF, le risposte al danno al DNA e processi associati alla cromatina. I suoi ruoli nella duplicazione del centrosoma, nella stabilità genomica e nel trasporto nucleo-citoplasmatico collegano la funzione di Npm1 al controllo della proliferazione e al mantenimento dell’omeostasi cellulare. L’attività e la localizzazione alterate della nucleofosmina sono state ampiamente studiate in oncologia e nella regolazione ematopoietica, rendendo Npm1 un bersaglio frequente per studi meccanicistici sullo stress oncogenico e sulla disfunzione nucleolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO B23/Nucleophosmin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Npm1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Npm1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Npm1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina B23/Nucleophosmin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Npm1 per lo studio della segnalazione di B23/Nucleophosmin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Npm1 critici per la funzione di B23/Nucleophosmin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Npm1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Npm1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal B23/Nucleophosmin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR B23/Nucleophosmin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Npm1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Npm1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.