Axl Plasmide Double Nickase (h): sc-400393-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Axl Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Axl Double Nickase Plasmid (h) e il Axl Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AXL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Axl Antibody (H-3): sc-166269
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Axl Plasmide Double Nickase (h) | sc-400393-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Axl Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400393-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AXL codifica per Axl, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia TAM attivata da ligandi quali GAS6, che regola la sopravvivenza cellulare, la proliferazione, la migrazione e l’efferocitosi. La segnalazione di Axl coinvolge le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK, JAK/STAT e NF-κB e modula le dinamiche delle integrine e del citoscheletro che influenzano l’adesione e la motilità cellulare. Nei contesti immunitari e stromali, Axl contribuisce alla risoluzione dell’infiammazione e alla rimozione fagocitica delle cellule apoptotiche, plasmando la segnalazione citochinica e il rimodellamento tissutale. Un’espressione o un’attività deregolata di AXL è stata associata a fenotipi invasivi e a microambienti immunitari alterati in molteplici modelli di cancro e di malattie infiammatorie, a supporto di studi meccanicistici sulla segnalazione del recettore e sul cross-talk tra vie.
Axl Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AXL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AXL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AXL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AXL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.