Atm Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400192-LAC

Il gene umano ATM codifica la chinasi serina/treonina Atm, un regolatore centrale della risposta al danno del DNA che viene rapidamente attivato dalle rotture a doppio filamento. Atm coordina la segnalazione dei checkpoint tramite la fosforilazione di substrati chiave, tra cui TP53, H2AX, CHEK2 e KAP1/TRIM28, integrando la scelta delle vie di riparo, le risposte allo stress replicativo e il controllo del ciclo cellulare. Questa rete di segnalazione si interfaccia con la ricombinazione omologa, il non-homologous end joining e il rimodellamento della cromatina per preservare la stabilità del genoma. Un’alterata funzione di ATM è fortemente associata a radiosensibilità e alla biologia della predisposizione al cancro, rendendo ATM un nodo ampiamente utilizzato per studiare il mantenimento del genoma, la segnalazione da stress e le vie dei soppressori tumorali nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Atm (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ATM in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Atm (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ATM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Atm. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ATM e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.