Ataxin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403590-ACT

ATXN2 codifica Ataxin-2, una proteina legante l’RNA che si associa ai poliribosomi e ai granuli di stress per regolare la stabilità dell’mRNA, la traduzione e le risposte cellulari allo stress. Attraverso interazioni con fattori del metabolismo dell’RNA e con la macchina di controllo della traduzione, Ataxin-2 influenza la proteostasi e programmi di segnalazione che modellano l’omeostasi neuronale e metabolica. Alterazioni della funzione e dell’espressione di ATXN2 sono implicate in fenotipi neurodegenerativi, tra cui l’atassia spinocerebellare di tipo 2 e la modificazione del rischio genetico nella sclerosi laterale amiotrofica, collegando questa proteina a vie che governano l’integrità sinaptica e la traduzione adattativa allo stress. In quanto nodo di connessione tra processamento dell’RNA e biologia della risposta allo stress, ATXN2 è ampiamente studiato in modelli di neurotossicità, aggregazione proteica e omeostasi cellulare.

Ataxin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATXN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ataxin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATXN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATXN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ataxin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATXN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ataxin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ataxin-2 nelle cellule tumorali con espressione di ATXN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.