Asparagine synthetase Plasmide Double Nickase (h): sc-402240-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Asparagine synthetase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h) e il Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ASNS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Asparagine synthetase Antibody (G-10): sc-365809
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Asparagine synthetase Plasmide Double Nickase (h) | sc-402240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Asparagine synthetase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASNS codifica l’asparagina sintetasi umana, un’amidotransferasi citosolica che catalizza la conversione, dipendente dall’ATP, di aspartato e glutammina in asparagina e glutammato. Questa attività collega l’omeostasi degli amminoacidi al metabolismo dell’azoto e sostiene le esigenze biosintetiche durante lo stress da carenza di nutrienti grazie all’integrazione con la risposta agli amminoacidi e con il controllo della traduzione regolato da mTOR. L’espressione di ASNS è regolata in modo dinamico da vie cellulari di stress, come la segnalazione mediata da ATF4, influenzando l’adattamento alla limitazione di glutammina e allo stress del reticolo endoplasmatico. Un’attività e un’espressione deregolate di ASNS sono state associate a stati metabolici alterati osservati nella dipendenza dei tumori dai nutrienti e a disturbi del neurosviluppo che coinvolgono una biosintesi dell’asparagina compromessa.
Asparagine synthetase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASNS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASNS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASNS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASNS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.