ARMCX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407214-ACT

ARMCX1 (armadillo repeat-containing, X-linked 1) codifica una proteina a ripetizioni armadillo associata ai mitocondri, implicata nella regolazione del traffico mitocondriale, della dinamica e del controllo qualità in modo dipendente dal tipo cellulare. Attraverso interazioni con il citoscheletro e con i macchinari di posizionamento degli organelli, ARMCX1 è stata collegata a processi quali la crescita dei neuriti, le risposte allo stress cellulare e il mantenimento dell’omeostasi mitocondriale. Un’alterata attività della famiglia ARMCX è stata associata a deregolazione dell’apoptosi, rimodellamento metabolico e cambiamenti nella motilità cellulare, rendendo ARMCX1 rilevante per studi di neurobiologia e fenotipi correlati al cancro. Essendo un gene legato al cromosoma X, ARMCX1 offre anche un contesto utile per indagare la regolazione con bias di sesso e gli effetti di dosaggio in modelli cellulari umani.

ARMCX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARMCX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARMCX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARMCX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARMCX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARMCX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARMCX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARMCX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARMCX1 nelle cellule tumorali con espressione di ARMCX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.